Ηλεκτρονική Διάθεση Μαθήματος
Μαθησιακά Αποτελέσματα
Εκμάθηση των βασικών αρχών των τεχνικών μοριακής βιολογίας που αφορούν την ανάλυση DNA, RNA και πρωτεϊνών και του ρόλου που παίζουν στη διερεύνηση της μοριακής βάσης γενετικών και επιγενετικών καταστάσεων και νοσημάτων.
Περιεχόμενο Μαθήματος
Απομόνωση νουκλεϊκών οξεών (DNA, RNA)
Ποσοτικός και ποιοτικός χαρακτηρισμός/προσδιορισμός
Τεχνικές ηλεκτροφόρησης νουκλεϊκών οξέων
(τύποι πηκτής, χρωστικές)
Ένζυμα γενετικής μηχανικής (περιοριστικά ένζυμα, τροποποιητικά ένζυμα)
Μέθοδοι ανάλυσης μεταλλάξεων (θεωρία)
Απομόνωση DNA ή RNA, (πρακτικό μέρος)
RT, RT-qPCR, (πρακτικό μέρος)
Πέψη με περιοριστικά ένζυμα, (πρακτικό μέρος)
Ηλεκτροφόρηση σε πηκτή αγαρόζης (πρακτικό μέρος)
Μέθοδοι ανάλυσης γονιδιακής έκφρασης
Northern blot, primer extension,
RNA protection assay,
RT-PCR, RT-qPCR
Απομόνωση πρωτεϊνών-Ποσοτικός πρσδιορισμός
Τεχνικές διαχωρισμού και ανάλυσης πρωτεϊνών
Απομόνωση πρωτεϊνών, Ποσοτικός προσδιορισμός ολικής συγκέντρωσης πρωτεϊνών (Bradford/BCA assay)
Παρασκευή πηκτής πολυακρυλαμιδίου παρουσία δωδεκυλο-θειικού νατρίου (Sodium Dodecyl S-Polyacrylamide Gel Electrophoresis, 1D-SDS-PAGE)
Ανοσοαποτύπωση – Western Blot (Ημέρα 1η) (πρακτικό μέρος)
-Διαχωρισμός πρωτεϊνών μέσω ηλεκτροφόρησης πηκτής σε αποδιατακτικές συνθήκες (SDS-PAGE)
-Γενική χρώση πηκτής (Blue-silver staining)
-Υγρή μεταφορά πρωτεϊνών από πηκτή SDS-PAGE σε PVDF μεμβράνη
-Μπλοκάρισμα μη ειδικών θέσεων μεμβράνης με επώαση σε διάλυμα γάλακτος ή BSA
-Επώαση PVF με πρωτογενές αντίσωμα (o/n)
Ανοσοαποτύπωση – Western Blot (Ημέρα 2η) (πρακτικό μέρος)
-Προετοιμασία PVDF για επώαση με δευτερογενές αντίσωμα
-Επώαση με αντιδραστήριο χημειοφωταύγειας
-Εμφάνιση αντισώματος
-Προβλήματα κατά την εμφάνιση και αντιμετώπιση
-Επεξεργασία PVDF για επώαση με επόμενο πρωτογενές αντίσωμα
(πρακτικό μέρος)